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颜子颖
摘 要 发展新型病毒表达载体系统是基因治疗研究的前提,理想的基因转移系统包括 安全靶向的传递方式、尽可能大的外源基因插入容量及目的基因可控表达.利用EB 病毒质粒型复制所必需的序列元件构建EB病毒表达载体,其有在人细胞中以不整合 宿主染色体稳定的符加子形式存在的特点并自主复制,本文围绕EB病毒载体特色及 在基因治疗应用的潜在可能,结合由细胞特异性受体介导基因转移技术,在体外组建 由自主复制的DNA为核心的"人工病毒"样核酸蛋白复合物,特异性地将EB病毒载体导入肝细胞中表达和复制,探索了EB病毒载体作用一种基因治疗新型候选载体的优势 及其定向导入人细胞表达途径。组蛋白通过水溶性碳二亚胺(EDC)作用接上半乳糖残基,使之保留DNA结合活性的同时能为细胞表面脱唾液酸糖蛋白受体识别而内吞,它们和EB病毒载体pEBluc结合形成的核酸蛋白复合物直接用于转染人细胞,荧光素酶仅在肝细胞系才有表达,HygromycinB选择可获转化细胞克隆,PEBluc在其中以染色体外附加子形式稳定存在并自主复制。在pEBluc和组蛋白形成的复合物中引入偶连上类似流感病毒血凝素N端结构的肽段的poly-lysine,组建`人工病毒'样颗粒提高了受体介导的转染效率, 能有效地将具有自主复制能力的质粒型EB病毒载体定向导入肝细胞表达。 另外,构建了一种外源基因在人甲胎蛋白启动子/增强子指导下转录的EB病毒 表达载体,仅在具甲胎蛋白表达能力的肝癌细胞系中才能有效表达外源基因。结合 肝细胞受体介导的基因转移,有可能发展一种将治疗基因特异导入原发性肝癌组织 表达而不影响正常细胞功能的基因治疗策略。 (博士学位论文简况表) | ||||||||